JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:52 Min. • July 8th, 2025
Sich entwickelnde Neuronen verlängern zytoplasmatische Prozesse aus ihren Zellkörpern durch das Auswachsen von Neuriten, um Dendriten und Axone zu entwickeln, die für die Kommunikation von Neuron zu Neuron unerlässlich sind.
Um die Wirkung eines Zielproteins auf das Wachstum von Neuriten zu untersuchen, nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit einem Poly-D-Lysin-beschichteten Deckglas an der Basis. Auf der Oberfläche des Deckglases befindet sich eine adhärente Kultur von primären kortikalen Neuronen, die aus dem embryonalen Rattengehirn stammen.
Behandeln Sie die Neuronen mit einer Mischung, die zwei Arten von Plasmiden enthält – ein EGFP-Plasmid, das für ein verstärktes grün fluoreszierendes Protein kodiert, und ein zweites Plasmid, das für das Zielprotein in einem geeigneten Transfektionsreagenz kodiert.
Das Transfektionsreagenz erleichtert den Eintritt der Plasmide in die Zellen.
Nach der Transfektion werden beide Plasmide exprimiert, wodurch grün fluoreszierende Proteine und Zielproteine entstehen. Die Expression von EGFP verleiht den co-transfizierten Zellen grüne Fluoreszenz.
Zielproteine mit Neuritenauswuchs-stimulierendem Potenzial initiieren die zelluläre Signalübertragung, di
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