Mikrosphären-Polymerase-Kettenreaktion zur Amplifikation einzelsträngiger DNA

Bei der Mikrosphären-PCR wird eine mikrogroße Kugel verwendet, die an Oligonukleotide auf ihrer Oberfläche gekoppelt ist, was die bevorzugte Amplifikation von einzelsträngiger DNA ermöglicht.

Um mit der Mikrosphären-PCR zu beginnen, nehmen Sie einen Reaktionsmix, der einzelsträngige DNA-Stränge enthält, Forward-Primer mit einem zusätzlichen Nukleotid-Tag, thermostabile DNA-Polymerase, dNTPs und Mikrosphären mit einzelsträngigen Oligonukleotidsonden.

Legen Sie das Rohr in einen Thermocycler und lassen Sie es unter den definierten Bedingungen laufen.

Im ersten Zyklus, bei der Annealing-Temperatur, bindet die Matrizen-DNA an die Sonde auf der Oberfläche der Mikrosphäre, so dass die Matrizen-DNA als Sinnesstrang fungiert. Während der Verlängerung verlängert die Polymerase die DNA, und der Duplex bleibt an die Mikrosphäre gebunden.

Im nächsten Zyklus, während der Denaturierung, trennt sich die Matrizen-DNA von der Mikrosphäre, so dass der Sondenstrang an die Oberfläche gebunden bleibt – und als Matrize für einen neuen Strang dient.

Während des Glühens bindet der markierte Primer an den Antisense-Strang. Später verlängert die Polymerase es, um den Sinnesstrang mit dem Nukleotid-Tag zu sy