JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:28 Min. • July 8th, 2025
Die Methylierung von DNA-Cytosin-Resten ist ein charakteristisches Merkmal von Leukozyten oder weißen Blutkörperchen.
Die Multiplex-Tröpfchenpolymerase-Kettenreaktion (mdPCR) ermöglicht die gleichzeitige Identifizierung mehrerer methylierter DNA-Regionen innerhalb der Leukozyten.
Bereiten Sie eine Mischung vor, die Reaktionspuffer, DNA-Polymerase und nukleasefreies Wasser enthält. Fügen Sie Vorwärts- und Rückwärtsprimer sowie Fluoreszenzhydrolysesonden hinzu, die für jede Zielregion spezifisch sind. Die Sonden bestehen aus verschiedenfarbigen Fluorophor-Reportern, die an Quencher gebunden sind, um die Fluoreszenzemission zu hemmen.
Fügen Sie Bisulfit-konvertierte DNA hinzu, wobei die unmethylierten Cytosine in Uracile desaminiert werden, während die methylierten Cytosine unverändert bleiben. Mischen.
Füllen Sie eine Glasspritze mit einem Trägeröl-Tensid-Gemisch und eine weitere mit einem Trägeröl-PCR-Gemisch und verbinden Sie diese mit dem mikrofluidischen Tröpfchengenerator. Das Trägeröl-wässrige PCR-Gemisch emulgiert in Tröpfchen im Sub-Nanoliter-Bereich. Das Tensid stabilisiert die Emulsion und verhindert das Verschmelzen von Tröpfchen.
Sammeln Sie die Tröpfchen und führen Sie d
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