JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:42 Min. • July 8th, 2025
Zell-Zell-Wechselwirkungen – vermittelt durch Proteine an benachbarten Zelloberflächen – können in lebenden Zellen mit einem Fluoreszenzfluktroskopie-Assay untersucht werden.
Nehmen Sie zunächst separate Zellkulturen, die einen Adhäsionsrezeptor exprimieren – ein Transmembranprotein. Der Rezeptor in den Zellen der beiden Populationen ist mit spektral getrennten fluoreszierenden Proteinen markiert. Diese fluoreszierenden Markierungen sind in der zytoplasmatischen Region des Rezeptors vorhanden und verhindern eine Interferenz mit der Zell-Zell-Interaktion.
Entsorgen Sie das Medium und fügen Sie Trypsin hinzu, um die Zellablösung zu erleichtern. Mischen Sie die beiden Zellpopulationen und inkubieren Sie, so dass die Rezeptoren der Nachbarzellen homotypische Trans-Wechselwirkungen bilden können.
Legen Sie die Zellen unter ein konfokales Mikroskop. Beleuchten Sie die Probe mit Laserquellen geeigneter Wellenlängen, wodurch eine Emission von beiden Fluoreszenzmarkierungen verursacht wird. Lokalisieren Sie zwei benachbarte Zellen mit verschiedenfarbigen Fluoreszenzsignalen, die in Kontakt stehen.
Erfassen Sie einen Zeilenscan – senkrecht zum Bereich der sich berührenden Zellmembranen – unt
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