JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 6:05 Min. • July 8th, 2025
Die Kernspinresonanzspektroskopie (NMR) ermöglicht die Detektion von Protein-Protein-Wechselwirkungen auf atomarer Ebene.
Um Wechselwirkungen zwischen globulären und helikalen Proteinen zu untersuchen, markieren gereinigte Wildtyp- oder mutierte globuläre Proteine mit 15N – einem Stickstoffisotop. Mischen Sie in einem NMR-Röhrchen die markierten globulären und unmarkierten helikalen Proteine in einem Lösungsmittel, das einen NMR-Standard enthält. Führen Sie den Schlauch in das NMR-Spektrometer ein.
Die Spektrometermagnete erzeugen ein starkes Magnetfeld, das die 15N-markierten globulären Proteinkerne parallel zum Feld ausrichtet. Ein Hochfrequenz- oder HF-Impuls regt die 15N-Kerne an, sich antiparallel zum Feld auszurichten.
Die Pulsfrequenz, die für den Übergang von 15N Kernen zwischen den beiden Zuständen benötigt wird, definiert die Resonanzfrequenz. Die Normalisierung der 15N-Resonanzfrequenz auf den NMR-Standard misst die chemische Verschiebung von 15N.
Das Magnetfeld wird so eingestellt, dass die 1H-Kerne – gebunden an 15N – parallel zum Feld ausgerichtet sind. Die HF-Impulse werden angepasst und die chemische Verschiebung von 1H wird aufgezeichnet.
Während Proteininteraktion
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