Verwendung des Phagen-Displays zur Auswahl von Proteinen mit hoher Affinität zu einem Zielprotein

Beginnen Sie die Phagenpräsentation, indem Sie eine Phagenbibliothek in die Vertiefungen einer Multi-Well-Platte geben, die mit dem Zielprotein beschichtet ist. Die Phagenbibliothek enthält gentechnisch veränderte Phagen, die jeweils eine individuelle Proteinvariante aufweisen, die mit einem Hüllprotein auf ihrer Oberfläche fusioniert ist. Inkubieren, so dass der Phagen und die Zielproteine interagieren können.

Phagen mit Proteinen mit einer hohen Zielproteinaffinität binden an das Zielprotein. Mit einem Puffer waschen und ungebundene Phagen entfernen. Fügen Sie eine saure Lösung hinzu, die die Wechselwirkungen zwischen Phagen und Zielprotein unterbricht und Phagen in die Lösung freisetzt. Neutralisieren Sie den pH-Wert der Lösung mit einem Puffer, um die Phagenstabilität zu erhalten.

Übertragen Sie die Phagen in ein frisches Röhrchen. Inkubieren Sie mit einer Blockierungslösung, die Proteine enthält, um unspezifische Wechselwirkungen zu vermeiden.

Übertragen Sie die Phagen in eine sich aktiv teilende E. coli-Suspension, infizieren Sie die Bakterien und initiieren Sie den Phagen-Replikationszyklus. Ergänzung mit Helferphagen, die die Bakterien infizieren und die Hüllproteine liefer