JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:31 Min. • July 8th, 2025
Regulatorische Proteine, wie Transkriptionsfaktoren, erkennen und binden an spezifische DNA-Sequenzen in Promotorregionen und regulieren so die Genexpression.
Um spezifische Transkriptionsfaktor-DNA-Wechselwirkungen unter Verwendung des elektrophoretischen Mobilitätsverschiebungsassays nachzuweisen, beginnen Sie mit einem Röhrchen, das einen gewünschten Transkriptionsfaktor und spezifische kurze, infrarote, fluoreszierende Farbstoff-markierte DNA-Sonden in einem Bindungspuffer enthält. Inkubieren Sie im Dunkeln, um das Photobleichen des Farbstoffs zu verhindern.
Die Ionenstärke und der pH-Wert des Puffers bieten geeignete Bedingungen für den Transkriptionsfaktor, um spezifische Bindungssequenzen auf der DNA-Sonde zu identifizieren und zu binden. Magnesiumionen im Puffer stabilisieren die Protein-DNA-Komplexe zusätzlich.
Fügen Sie der Mischung einen geeigneten Ladefarbstoff hinzu, um den Fortschritt der Elektrophorese sichtbar zu machen. Laden Sie diese Mischung und die DNA-Sonden in die Vertiefungen eines vorgefertigten, nicht denaturierenden Polyacrylamidgels.
Führen Sie die Elektrophorese im Dunkeln durch.
Das angelegte elektrische Feld bewirkt, dass sich ungebundene, negativ gel
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos