JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 5:42 Min. • July 8th, 2025
Strahleninduzierte DNA-Doppelstrangbrüche (DSBs) initiieren die Rekrutierung von DNA-Reparaturproteinen an der beschädigten Stelle – und aktivieren so die DNA-Reparatur.
Um die DNA-Reparaturproteine γH2AX und 53BP1 an DSB-Stellen mittels indirekter Immunfluoreszenz nachzuweisen, nehmen Sie Deckgläser mit Epithelzellen. Bestrahlen Sie eine Teilmenge der Zellen. Inkubieren, so dass die Kontrolle nicht bestrahlte und bestrahlte Zellen für bestimmte Zeiten wachsen kann.
Mit einem Puffer behandeln, um die Zellkerne zu extrahieren. Fixieren Sie die Zellkerne, um ihre Morphologie zu erhalten. Mit einer Blockierungslösung behandeln, um die unspezifische Bindung an Primärantikörper zu minimieren.
Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die auf die beiden DNA-Reparaturproteine abzielen. Die Antikörper binden an die jeweiligen Proteine.
Inkubieren Sie mit Sekundärantikörpern, die mit roten bzw. grünen Fluorophoren markiert sind. Die Sekundärantikörper – spezifisch für jeden Primärantikörper – binden an ihre Ziele. Fügen Sie ein Eindeckmedium mit DAPI auf einen Objektträger hinzu. Montieren Sie die Deckgläser für die Bildgebung.
DAPI – ein DNA-bindender Farbstoff – bindet an die AT-reichen Nebenri
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos