JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:43 Min. • July 8th, 2025
Um die Wechselwirkung von Proteinen mit Lipidmolekülen zu untersuchen, beginnen Sie mit zwei Kapillarröhrchen. Geben Sie fluoreszierend farbstoffmarkierte Testproteine in beiden Röhrchen und unmarkierte Lipidmoleküle zu einem von ihnen. Platzieren Sie diese Kapillaren in einem Array und platzieren Sie sie in einem mikroskaligen Thermophorese-Instrument.
Bestrahlen Sie die proteinhaltige Kapillare mit fokussiertem Infrarotlicht, wodurch ein Temperaturanstieg im Brennpunkt erzeugt wird, der durch die Lösung diffundiert und einen Temperaturgradienten innerhalb eines engen Bereichs erzeugt, der fluoreszenzmarkierte Proteine enthält.
Der Fluoreszenzdetektor sammelt das Fluoreszenzsignal an der gleichen Stelle der Kapillare, an der der Laser fokussiert ist. Der Prozessor wandelt das Signal um und erzeugt ein Diagramm der relativen Fluoreszenz als Funktion der Zeit.
In einem Temperaturgradienten beginnen markierte Proteine von der heißeren Region in die kühlere Region zu wandern und zeigen Thermophorese – ein Phänomen der temperaturabhängigen Migration.
Aufgrund der Thermophorese nimmt die Fluoreszenzintensität im Laufe der Zeit allmählich ab und erreicht einen stationären Zustand, in dem
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