JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 2:43 Min. • July 8th, 2025
Protein-Phospholipid-Wechselwirkungen auf der Zellmembran sind entscheidend für die Regulation verschiedener zellulärer Prozesse.
Um Zielprotein-Phospholipid-Wechselwirkungen in vitro mit quantitativer Durchflusszytometrie nachzuweisen, nehmen Sie ein Röhrchen mit einer gewünschten Konzentration an Zellmembran-Nachahmung – mikrometergroße, lipophile, farbstoffmarkierte Phospholipid-Vesikel – in Puffer.
Geben Sie eine geeignete Konzentration verschiedener fluoreszenzmarkierter Zielproteine in Lösung.
Injizieren Sie die Suspension in das Durchflusszytometer. Stellen Sie die Parameter des Fluidiksystems auf eine niedrige Durchflussrate ein, um genügend Zeit für die Protein-Phospholipid-Wechselwirkungen zu haben.
Da die fluoreszenzmarkierten Proteine und die Phospholipid-Vesikel im Strömungskanal interagieren, steigt die Konzentration der an die Vesikel gebundenen Proteine.
Wenn diese Komplexe die Laserstrahlen von bestimmten Fluoreszenzkanälen passieren, die geeignete Wellenlängen bereitstellen, werden sie angeregt. Diese angeregten Proteine und Phospholipid-Vesikel in dem Komplex senden bei Entspannung in den Grundzustand entsprechende Fluoreszenzsignale aus, die von den entsprechend
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