Quantitative In-Cell-Wasserstoff-NMR-Spektroskopie zur Überwachung von Protein-Liganden-Wechselwirkungen

Um die Wechselwirkungen von Zielproteinen mit niedermolekularen Testliganden in einer nativen zellulären Umgebung zu überwachen, beginnen Sie mit einem NMR-Röhrchen, das mit einem Puffer gefüllt ist, der einen Gelpfropfen an der Basis enthält. Injizieren Sie die in Agarose eingebetteten Zielproteinzellen in das NMR-Röhrchen und bilden fadenförmige Strukturen.

Laden Sie das Rohr in die Durchflusseinheit eines Bioreaktors und versorgen Sie es mit einem Wachstumsmedium, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu erhalten. Setzen Sie die Durchflusseinheit in ein Kernspinresonanz- oder NMR-Instrument ein.

Unter einem starken Magnetfeld werden die Atomkerne der Wasserstoffatome der Proteine magnetisiert und richten sich parallel zum Feld aus, wodurch sie sich an einen niederenergetischen Zustand anpassen.

Wenden Sie einen Hochfrequenzimpuls an, der bewirkt, dass sich die Kerne antiparallel zum Magnetfeld ausrichten, wodurch sie in Zustände mit höherer Energie übergehen können.

Nach einem kurzen Impuls kehren die Kerne in ihre ursprüngliche Position zurück und geben die absorbierte Energie ab. Der Detektor fängt diese Energie ein und erzeugt ein NMR-Spektrum, das die Resonanzfrequenzen des Wass