JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:19 Min. • July 8th, 2025
Ein Proteinoligomer ist ein Komplex aus mehreren Proteinuntereinheiten, die miteinander verbunden sind, um eine größere funktionelle Einheit zu bilden.
Zur Bestimmung des Molekulargewichts von Proteinmonomeren und deren Oligomeren in Lösung mittels SEC-MALS, einer Kombination aus Größenausschlusschromatographie und Mehrwinkel-Lichtstreuung, beginnen Sie mit einer Größenausschlusschromatographie (SEC) Säule.
Die Säule enthält poröse, siebartige kugelförmige Gelkügelchen, die kleinere Moleküle in sich einschließen. Äquilibrieren Sie die Säule mit einem Puffer, der mit dem nativen Zustand des Proteins kompatibel ist.
Laden Sie eine Probe mit Proteinmonomeren und -oligomeren an den oberen Rand der Säule.
Während der Strömung passieren die Oligomere den Zwischenpartikelraum der Säule, während die Monomere in den Poren der Kügelchen eingeschlossen werden. Dies führt dazu, dass die größeren Proteinoligomere schneller reisen als die kleineren.
Richten Sie die schnell eluierenden Oligomere, gefolgt von den langsam eluierenden Monomeren, auf den MALS-Detektor.
Beim Passieren des Detektors werden sie von einem Laserlicht beleuchtet, das in verschiedenen Winkeln gestreut wird. Die Oligomere mi
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