Kompetitiver Bindungsassay zur Identifizierung von Verbindungen, die Rezeptor-Liganden-Wechselwirkungen stören

Der kompetitive Bindungsassay identifiziert kleine Moleküle, die Rezeptor-Liganden-Wechselwirkungen stören, indem sie kompetitiv an einen Zielrezeptor binden und so die natürliche Ligandenbindung hemmen.

Um die Wechselwirkungen eines Rezeptors mit seinem natürlichen Liganden in Gegenwart eines rezeptorspezifischen niedermolekularen Antagonisten zu identifizieren, beginnen Sie mit einer Suspension menschlicher T-Lymphozytenzellen, die den Zielrezeptor exprimieren.

Geben Sie die Zellsuspension in die Vertiefungen einer Multi-Well-Platte, die steigende Antagonistenkonzentrationen enthält. Ausbrüten. Der Antagonist bindet an die orthosterische Bindungsstelle – die natürliche Ligandenbindungsstelle des Rezeptors.

Geben Sie eine feste Konzentration fluoreszenzmarkierter natürlicher Liganden in die Vertiefungen. Ausbrüten.

Bei niedrigen Konzentrationen besetzen die Antagonisten nur wenige orthosterische Bindungsstellen, was eine natürliche Ligandenbindung an die Rezeptoren ermöglicht. Bei höheren Konzentrationen besetzen die Antagonisten jedoch die meisten orthosterischen Bindungsstellen, was eine minimale natürliche Liganden-Rezeptor-Bindung ermöglicht.

Zentrifugieren Sie, um die Zellen