ELISA-basierter Reporter-Assay zur Untersuchung der Rezeptor-Liganden-Interaktion in BW-Zellen

Um Rezeptor-Liganden-Wechselwirkungen zu untersuchen, beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die Medien mit Zielzellen enthält, die Testliganden auf ihrer Oberfläche exprimieren.

Fügen Sie manipulierte Maus-BW-Zellen hinzu – eine neuartige B-Zell-Population, die membrangebundene chimäre Rezeptoren exprimiert. Chimäre Rezeptoren bestehen aus der extrazellulären Domäne eines bestimmten Rezeptors, die mit der Transmembran und der intrazellulären Signaldomäne des B-Zell-Rezeptors fusioniert ist.

Liganden auf den Zielzellen interagieren mit der extrazellulären Domäne der chimären Rezeptoren der BW-Zellen und bewirken so eine Aktivierung der intrazellulären Signaldomäne in den BW-Zellen. Dies löst die nachgelagerte Signalübertragung und die Produktion von Zytokinen aus – sekretorische Reportermoleküle, die außerhalb der BW-Zellen freigesetzt werden und in den Medien erscheinen.

Zentrifugieren Sie die Platte. Der zytokinhaltige Überstand wird in eine ELISA-Platte überführt, die mit Anti-Zytokin-Antikörpern vorbeschichtet ist. Zytokine interagieren mit den Fab-Regionen der Antikörper, was zu ihrer Immobilisierung auf der Plattenoberfläche führt.

Behandeln Sie die Platte mit einer Blockl