JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:56 Min. • July 8th, 2025
Nukleosomen – eukaryotische DNA-Repeating-Einheiten – bestehen aus DNA-Segmenten, die um Histon-Proteinkerne gewickelt sind. Die DNA-Enthüllung um den Histonkern ist entscheidend für die Dynamik der Nukleosomen.
Um die Dynamik des Nukleosoms zu erfassen, beginnen Sie mit einem glatten, funktionalisierten Glimmersubstrat, das auf einem Rasterkraftmikroskop, einem AFM, einem Scannertisch montiert ist. Überlagern Sie das Substrat mit einem nukleosomenhaltigen Puffer.
Die negativ geladene Nukleosomen-DNA interagiert mit positiven Ladungen auf dem funktionalisierten Glimmer und immobilisiert sie auf der Oberfläche. Waschen Sie das immobilisierte Glimmersubstrat mit einem Puffer, um eine Überfüllung der Nukleosomen zu verhindern.
Übertragen Sie den nukleosomenhaltigen Scannertisch in eine Bildgebungskammer mit einem vormontierten Cantilever, mit einer Spitze am Rand und nach oben zu den Nukleosomen.
Füllen Sie die Kammer mit einem Imaging-Puffer. Richten Sie den Laserstrahl auf die Auslegerrückseite aus, um genaue Ablenkungsmessungen zu gewährleisten.
Die AFM-Spitze oszilliert nahe an den vollständig umhüllten Nukleosomen und scannt die Oberfläche, um in regelmäßigen Abständen die Höhe d
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