JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 8:15 Min. • July 8th, 2025
Glykogen, ein verzweigtes Glukosepolymer, ist eine Energiereserve in subzellulären intermyofibrillären, intramyofibrillären und subsarkolemmalen Kompartimenten innerhalb der menschlichen Skelettmuskulatur.
Um die subzelluläre Glykogenverteilung mit Hilfe der Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) zu quantifizieren, wird isoliertes menschliches Skelettmuskelgewebe gewonnen. Mit Glutaraldehyd fixieren, um die Gewebestruktur zu erhalten. Das Gewebe wird nach dem Fixieren in einer Osmiumtetroxid- und Kaliumferrocyanidlösung fixiert.
Der reduzierte Osmium-Ferrocyanid-Komplex bindet an die Hydroxylgruppen im Glykogen und verbessert so den Kontrast der Glykogenpartikel im Muskel. Zusätzlich werden Membranen und sarkoplasmatisches Retikulum – ein membrangebundenes Organell – gefärbt.
Dehydrieren Sie das Gewebe bei steigenden Ethanolkonzentrationen. In Harz einbetten und einen festen Block bilden. Erhalten Sie ultradünne Schnitte mit längsorientierten Muskelfasern; Übertragung auf TEM-Gitter.
Tauchen Sie die Gitter in Uranylacetat, Schwermetalllösung. Uranyl-Ionen binden an negativ geladene Lipide und Proteine und machen sie elektronendicht. Mit Bleicitratlösung färben.
Blei-Ionen binden
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