Mastzell-Degranulationsassay zur Untersuchung der Wirkung einer Zielchemikalie

Mastzellen – spezialisierte weiße Blutkörperchen – enthalten sekretorische Granulate, die reich an lysosomalen Enzymen wie Beta-Hexosaminidase sind.

Um eine Mastzelldegranulation durchzuführen – ein Prozess, bei dem sekretorische Granulate freigesetzt werden, beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die eine mit Immunglobulinen vorbehandelte peritoneale Mastzellsuspension der Maus enthält.

Behandeln Sie die Zellen mit einer Zielchemikalie. Die Zielchemikalie mit stimulierendem Potenzial interagiert mit vorgebundenen Immunglobulinen an den spezifischen Rezeptoren der Mastzellen. Dadurch wird die Bewegung von Granulaten, die Beta-Hexosaminidase enthalten, an die Zelloberfläche aktiviert und an die Lösung abgegeben.

Zentrifugieren Sie die Platte, um die Zellen zu pelletieren, und überführen Sie den enzymhaltigen Überstand in eine leere Vertiefung einer frischen Platte. Behandeln Sie die Zellpellets mit einem Lysepuffer, um die Zellen zu lysieren und ihren Inhalt in das Lysat, einschließlich intrazellulärer Beta-Hexosaminidase, freizusetzen.

Geben Sie das enzymhaltige Lysat in eine weitere Vertiefung derselben Multi-Well-Platte. Behandeln Sie beide Vertiefungen mit dem Substrat des En