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Immunologie
0 Aufrufe • 3:53 Min. • July 8th, 2025
Kupffer-Zellen sind residente Makrophagen, die in den Sinusoiden der Leber lokalisiert sind und die Leber vor Infektionen schützen.
Um Kupffer-Zellen von Mäusen zu isolieren, nehmen Sie eine frisch geerntete perfundierte Mausleber in einer mediumhaltigen Schale. Der Leberperfusionsschritt mit Kollagenase verdaut die extrazelluläre Matrix, was zu einer Dissoziation der Leberzellen führt.
Brechen Sie die Leberkapsel, um die dissoziierten Leberzellen freizusetzen, einschließlich Parenchymzellen, PCs und nicht-parenchymale Zellen, NPCs, einschließlich der Kupffer-Zellen, Endothelzellen, Sternzellen und der verbleibenden Erythrozyten.
Filter, um Schmutz zu entfernen. Führen Sie eine Differenzialzentrifugation mit niedriger Geschwindigkeit am Filtrat durch, um die PCs selektiv zu sedimentieren. Sammeln Sie den NPC-haltigen Überstand. Zentrifuge, um die Zellen zu konzentrieren.
Resuspendieren Sie die Zellen in Medium und Schicht auf einem diskontinuierlichen isotonischen Dichtegradienten mit zwei Gradientenmedienschichten unterschiedlicher Dichte. Bei der Zentrifugation trennen sich die Zellen anhand ihrer Dichte relativ zum Gradientenmedium.
Sammeln Sie die angereicherte NPC-Schicht in d
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