Isolierung von Makrophagen aus dem Spinalganglion der Maus mittels mechanischer Dissoziation

Das Spinalganglion (DRG) ist eine Ansammlung von neuronalen Zellkörpern entlang des Rückenmarks, die sensorische Informationen vom peripheren zum zentralen Nervensystem transportieren. Die Schädigung der peripheren Nerven führt zur Akkumulation von Makrophagen in der DRG und zur Entwicklung von neuropathischen Schmerzen.

Um lebensfähige Makrophagen mit einer enzymfreien Methode zu isolieren, nehmen Sie frisch präpariertes Maus-DRG-Gewebe in einem Homogenisator, der mit eiskaltem Puffer gefüllt ist, um den zellulären Stress zu begrenzen. Homogenisieren Sie das Gewebe mit einem Stößel mechanisch, um die Zellen freizusetzen.

Filtrieren Sie durch ein Zellsieb, um Zellklumpen zu entfernen und eine einzellige Suspension im Durchfluss zu erhalten. Das Gewebehomogenat enthält Neuronen und nicht-neuronale Zellen, zu denen Makrophagen und frei schwebendes Myelin gehören – die isolierende Hülle der Neuronen.

Geben Sie das gefilterte Homogenat in ein Röhrchen mit einem Dichtegradientenmedium und zentrifugieren Sie. Unter Zentrifugalkraft setzen sich die lebensfähigen Zellen mit höherer Auftriebsdichte am Boden des Röhrchens ab und bilden ein Pellet, während das Myelin in der Schwebe bleibt. En