Isolierung von Lymphozyten aus einem Peyer-Pflaster der Maus

Peyer-Pflaster, PPs, Aggregate aus organisiertem lymphatischem Gewebe in der Dünndarmwand, enthalten Immunzellen wie B-Lymphozyten, T-Lymphozyten, dendritische Zellen und Makrophagen.

Um Lymphozyten aus Maus-PPs zu isolieren, beginnen Sie mit einer euthanasierten Maus. Schnitte die Bauchdecke ein und lege die Bauchhöhle frei. Lokalisiere den Blindfuß. Präpariere den ileozökalen Übergang, um den Blinddarm vom Dünndarm zu trennen.

Exzidieren Sie das Mesenterium und schneiden Sie den Dünndarm am Zwölffingerdarm ein, um den Dünndarm aus der Bauchhöhle zu entfernen. Legen Sie den Dünndarm in eine Multi-Well-Platte mit gekühltem Medium und spülen Sie ihn aus, um Ablagerungen zu entfernen.

Positionieren Sie den Dünndarm mit der mesenterialen Seite nach unten und befeuchten Sie ihn mit Medium, um die Hydratation des Gewebes aufrechtzuerhalten. Identifizieren Sie die PPs – weiße, mehrlappige Aggregate auf der anti-mesenterialen Seite der Darmwand.

Schneiden Sie die PP vorsichtig heraus, ohne das umgebende Darmgewebe. In ein Röhrchen mit Medium umfüllen. Unter ständigem Rühren inkubieren. Dieser Agitationsschritt löst den Schleim, die Zelltrümmer und alle Fäkalien von den PPs und verbessert