Isolierung von mononukleären Zellen des peripheren Blutes aus menschlichen Buffy Coats

Mononukleäre Zellen des peripheren Blutes, PBMCs, bestehen aus einer heterogenen Population spezialisierter Immunzellen, darunter Lymphozyten, Monozyten und dendritische Zellen.

Um PBMCs zu isolieren, beginnen Sie mit einem Röhrchen mit einem frisch gewonnenen menschlichen Buffy-Coat-Blut. Das Blut der Buffy-Hülle enthält PBMCs sowie Granulozyten mit mehrlappigen Zellkernen, Erythrozyten und Blutplättchen, die im Plasma suspendiert sind.

Überlagern Sie die Buffy-Coat-Suspension vorsichtig über ein gleiches Volumen eines Dichtegradienten-Mediums mit einer gewünschten spezifischen Dichte, die für die PBMC-Trennung optimal ist.

Während der Zentrifugation trennen sich die verschiedenen Zelltypen in unterschiedliche Schichten, basierend auf den Zelldichten relativ zum Gradientenmedium. Darüber hinaus fördern die Polysaccharide im Dichtegradientenmedium die Erythrozytenaggregation und -sedimentation.

Die Erythrozyten und Granulozyten mit höherer Dichte sedimentieren zum Boden des Röhrchens, während das Plasma mit der geringsten Dichte die oberste Schicht bildet. Die PBMCs, die eine geringere Dichte als das Dichtegradientenmedium aufweisen, bilden eine wolkige weiße Schicht an der Schnitt