Isolierung und Reinigung von B-Zellen aus menschlichem peripherem Blut

Um eine immunomagnetische negative Trennung von B-Zellen durchzuführen, sammeln Sie menschliches peripheres Blut in einem gerinnungshemmenden Röhrchen, um die Blutgerinnung zu verhindern. Fügen Sie rote Blutkörperchen, RBC und Lysepuffer hinzu, um die Erythrozyten zu lysieren, ohne andere Blutzellen zu beeinträchtigen.

Zentrifuge, um die intakten, dichteren Blutzellen aus den weniger dicht lysierten Erythrozyten, die im Überstand verbleiben, zu sedimentieren. Entsorgen Sie den Überstand. Suspendieren Sie das Pellet in frischem Medium.

Übertragen Sie die Zellen auf eine Kulturplatte. Inkubieren, damit die Makrophagen und Monozyten an der Platte haften können, während die nicht adhärenten Zellen, einschließlich B-Zellen, in Suspension bleiben.

Sammeln Sie die Zellen in Suspension in einem frischen Röhrchen. Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren und in einem Puffer wieder zu suspendieren.

Fügen Sie eine Cocktaillösung hinzu, die biotinylierte Antikörper enthält, die spezifisch für andere Blutzellen als B-Zellen sind. Die Antikörper binden an Antigene auf der Oberfläche von Nicht-B-Zellen, so dass die B-Zellen unmarkiert bleiben.

Zentrifuge. Der Überstand mit ungebundenen An