Funktionelle Bewertung von Antikörper-sezernierenden B-Zellen mittels ELISpot-Assay

Antikörper-sezernierende B-Zellen (ASCs) sind differenzierte B-Zellen, die Antikörper-Isotypen, einschließlich IgG und IgM, sezernieren, um den Schutz vor Krankheitserregern zu gewährleisten.

Um eine funktionelle Bewertung von ASCs in vitro durchzuführen, beginnen Sie mit dem Enzyme-linked Immunosorbent Spot Assay. Nehmen Sie eine ELISpot-Platte, die an der Basis eine aktivierte Polyvinylidenfluoridmembran enthält.

Inkubieren Sie die Vertiefungen mit polyklonalen Antikörperfragmenten, die ausschließlich Fab-Regionen ohne die Fc-Region des Antikörpers enthalten. Jede Fab-Region verfügt über eine Bindungsstelle für spezifische Antikörper-Isotypen – IgG oder IgM, was die Identifizierung beider Isotypen ermöglicht.

Während der Inkubation heften sich die Antikörperfragmente an die Membran, was zu einer Immobilisierung führt.

Überlagern Sie die Vertiefungen mit Blocklösungen, um eine unspezifische Bindung zu verhindern. Besiedeln Sie die Platte mit aktivierten Antikörper-sezernierenden B-Zellen und inkubieren Sie. Die ASCs sezernieren verschiedene Isotypen, darunter IgG und IgM, die an die membrangebundenen Antikörperfragmente binden.

Waschen Sie die Platte mit einem Puffer, um ungebunde