Isolierung und Kultivierung von Knochenmark-Stromazellen aus einem Schienbein der Maus

Knochenmarkstromazellen, BMSCs – Vorläufer von Skelettgewebelinien – befinden sich in der Knochenmarkhöhle zusammen mit einer heterogenen Zellpopulation, die hämatopoetische Stammzellen, HSCs und differenzierte Blutzellen umfasst.

Um BMSCs zu isolieren, beginnen Sie mit einem frisch entnommenen Schienbein der Maus. Schneiden Sie die proximalen und distalen Enden des Knochens ab, um die Knochenmarkhöhle freizulegen. Legen Sie den geschnittenen Knochen in ein geeignetes Mikrofuge-Röhrchen mit Medium.

Zentrifugieren Sie mit hoher Geschwindigkeit, um das Knochenmark aus dem Knochen zu spülen und ein Knochenmarkpellet am Boden des Röhrchens zu bilden. Entferne den Knochen aus der Röhre. Zerreiben Sie mit einer Nadel, die an einer Spritze befestigt ist, das Knochenmark, um die Klumpen aufzubrechen.

Füge der Suspension Medium hinzu. Filtrieren Sie durch ein Zellsieb mit geeigneter Maschenweite, um die Knochenfragmente zu entfernen. Das Filtrat, das die Knochenmarkzellen enthält, wird in eine Kunststoff-Kulturplatte überführt.

Während der Inkubation für die entsprechende Dauer haften die BMSCs am Boden der Kunststoffkulturplatte und vermehren sich, während die nicht adhärenten Zellen, eins