JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 5:45 Min. • July 8th, 2025
Regulatorische T-Zellen oder Tregs sind eine spezialisierte T-Zell-Subpopulation, die immunsuppressive Wirkungen ausübt, um die Homöostase des Immunsystems zu vermitteln. Tregs exprimieren die Zelloberflächenmarker CD4, CD25 und Neuropilin 1, Nrp1 sowie die nukleären Transkriptionsfaktoren Forkhead Box P3, Foxp3 und Helios.
Um Tregs aus pankreasdrainierenden Lymphknoten (PDLNs) der Maus zu isolieren, legen Sie ein Metallnetz über eine konische Röhre. Legen Sie die PDLNs auf das Netz und schleifen Sie das Gewebe, um es mechanisch zu dissoziieren. Geben Sie ein geeignetes Medium über das Netz und spülen Sie die Zellen in das Rohr.
Zentrifuge, Entfernung abgestorbener Zellen und Zelltrümmer. Resuspendieren Sie die lebensfähigen Zellen im Medium. Führen Sie die Zellen durch eine Zellsiebkappe, die an einem Röhrchen mit rundem Boden befestigt ist, um eine homogene Einzelzellsuspension zu erhalten, bei der alle verbleibenden Zellklumpen entfernt werden.
Fügen Sie Fluorochrom-konjugierte Anti-CD4-, Anti-CD25- und Anti-Nrp1-Antikörper hinzu. Die anti-CD4- und anti-CD25-Antikörper binden an ihre jeweiligen Zelloberflächenantigene auf Tregs. Gleichzeitig bindet Anti-Nrp1 an die Nrp1-Rezeptor
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