Dreidimensionales Thymuskultursystem zur Erzeugung von iPSC-abgeleiteten Thymus-Emigranten

Zur Erzeugung von iPSC-abgeleiteten Thymus-Emigranten, iTEs aus unreifen T-Zellen in einem 3D-Thymus-Organkultursystem, werden mit Desoxyguanosin und dGUO behandelte fetale Maus-Thymuslappen in geeigneten Medien eingenommen.

dGUO gelangt in das thymusische Milieu und zerstört endogene thymusische Lymphozyten, wodurch deren Interferenz mit iPSC-abgeleiteten unreifen T-Zellen während der Co-Kultur verhindert wird.

Mache einen tiefen Schnitt in der Mitte jedes Thymuslappens. Übertragen Sie die Lappen in eine frische Kulturschale, die Medium enthält, das mit den Wachstumsfaktoren, dem Stammzellfaktor, dem FLT3-Liganden und Interleukin-7 ergänzt ist.

Pipettieren Sie das mit dem Thymuslappen enthaltende Medium in die Vertiefungen einer 3D-Kulturplatte. Fügen Sie iPSC-abgeleitete unreife T-Zellen hinzu. Ausbrüten. Die T-Zellen wandern durch den Schnitt in die Thymuslappen.

Im thymischen Milieu binden die Wachstumsfaktoren FLT3-Ligand und IL-7 an ihre jeweiligen Rezeptoren auf unreifen T-Zellen, was zur Aktivierung von Transkriptionsfaktoren und zur Expression spezifischer Gene führt.

Infolgedessen durchlaufen die unreifen T-Zellen eine Reihe von Veränderungen und erhalten spezifische Eige