CD-Markererkennung von humanen Zytokin-induzierten Killerzellen mittels Durchflusszytometrie

Zytokin-induzierte Killerzellen, CIK-Zellen, sind heterogene Immunzellpopulationen, die ex vivo aus Kulturen mononukleärer Zellen des peripheren Blutes (PBMC) erzeugt werden, die mit spezifischen Zytokinen und monoklonalen Antikörpern stimuliert werden. CIK-Zellen umfassen Zellpopulationen, darunter CD3+CD56+ NK-T-Zellen, CD3+CD56- T-Zellen und CD3-CD56+ NK-Zellen.

Um den CIK-Zellanteil zu bestimmen, beginnen Sie mit Röhrchen, die eine PBMC-abgeleitete CIK-Zellsuspension enthalten. Anti-CD3- und Anti-CD56-Antikörper, die an verschiedene Fluorophore konjugiert sind, und deren Mischung in die dafür vorgesehenen Röhrchen geben. Geben Sie Isotyp-Kontrollantikörper, die an ähnliche Fluorophore wie spezifische Antikörper konjugiert sind, in andere Röhrchen.

Fluoreszenzmarkierte Anti-CD3- und Anti-CD56-Antikörper erkennen und binden an CD3 und CD56, die auf CIK-Zellpopulationen exprimiert werden. Isotyp-Kontrollantikörpern fehlt die Zielantigenspezifität, was unspezifische Hintergrundsignalmessungen erleichtert.

Pipettieren Sie die Zellen in Röhrchen mit rundem Boden und Zellsiebkappen, die bei der Entfernung von Zellaggregaten helfen. Laden Sie die Röhrchen in ein Durchflusszytometer-Kar