JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:25 Min. • July 8th, 2025
Die Samenkanälchen der Hoden enthalten Sertoli-Zellen, die die Keimzellen ernähren. Sertoli-Zellen sind über Tight Junctions miteinander verbunden und fest an die hyaluronsäurereiche Basalmatrix gebunden. Diese Anordnung von Sertoli-Zellen reguliert den Eintritt der Immunzellen in den Tubulus und schützt die sich entwickelnden Keimzellen vor dem Abbau.
Um Sertoli-Zellen zu isolieren, beginnen Sie mit einem Röhrchen mit teilweise verdauten Samenkanälchen, die aus Maushoden stammen. Diesen Tubuli fehlen peritubuläre Zellen – glatte Muskelzellen, die die Samenkanälchen umgeben.
Behandeln Sie die Tubuli mit einem Enzymcocktail, der Hyaluronidase – essentiell für die Hydrolyse von Hyaluronsäure – und DNase enthält.
Hyaluronidasen dringen in die Tubuli ein und spalten Hyaluronsäure – ein Basalpolysaccharid – wodurch die Ablösung der Sertoli-Zellen von der Basalmatrix eingeleitet und Keimzellen in die Lösung freigesetzt werden. DNase verdaut alle DNA-Verunreinigungen aus der Lösung und verhindert so die Zellaggregation.
Waschen Sie die enzymatisch verdauten Tubuli mit einem Puffer und entfernen Sie dabei Restenzyme, Zellfragmente und Keimzellen. Suspendieren Sie die verdauten Tubuli wiede
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