Eine In-vitro-Technik zur Erzeugung von extrazellulären Fallen für humane Neutrophile

Neutrophile extrazelluläre Fallen (NETs) sind netzartige Strukturen aus Chromatinfasern, die mit antimikrobiellen Proteinen komplexiert sind, die Krankheitserreger einfangen und neutralisieren. NETs werden von Neutrophilen sezerniert – Immunzellen, die antimikrobielle Proteine in spezialisierten zytoplasmatischen Granula speichern.

Um die NET-Bildung in vitro zu untersuchen, nehmen Sie eine Suspension von isolierten Neutrophilen ein. Fügen Sie Phorbolmyristatacetat oder PMA hinzu – eine lipophile entzündungsfördernde Verbindung. Plattieren Sie die Zellen und inkubieren Sie.

PMA durchquert die neutrophile Membran und gelangt in das Zytoplasma, wo es an die Proteinkinase C oder PKC bindet und diese aktiviert.

Aktiviertes PKC induziert nachgeschaltete Signalwege zu phosphorylierten zytoplasmatischen Komponenten der NADPH-Oxidase - einem Enzymkomplex - und bewirkt deren Assemblierung auf der Plasma- und Granulmembran. Der Komplex produziert reaktive Sauerstoffspezies oder ROS.

Die ROS bewirken die Freisetzung von Proteasen und antimikrobiellen Proteinen aus dem Granulat. Granuläre Proteasen translozieren zusammen mit ROS-aktivierten Citrullinierungsenzymen in den Zellkern.

Die körnigen