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Immunologie
0 Ansichten • 3:19 Min. • July 8th, 2025
Die Gingiva oder das Zahnfleischgewebe umgibt den zervikalen Teil der Zähne und den Kieferknochen.
Das Zahnfleischgewebe besteht aus einer Epithelschicht, die durch eine kollagen-IV-reiche Basalmembran vom darunterliegenden Bindegewebe getrennt ist. Das gingivale Bindegewebe enthält ein Immunzellnetzwerk, zu dem Lymphozyten, Mastzellen und Neutrophile gehören, die das Zahnfleisch vor Infektionen schützen.
Um das zahnfleischlose Immunzellnetzwerk zu isolieren, nehmen Sie murine Zahnblöcke, die fest anhaftendes Zahnfleischgewebe enthalten. Behandeln Sie die Blöcke mit einem Enzymcocktail, der Kollagenasen vom Typ 4 und DNasen enthält.
Kollagenasen dringen in das Gewebe ein, bauen Kollagen-IV ab und stören die Basalmembran und das Zahnfleischepithel, wodurch sich das Zahnfleisch von den Zähnen löst. In der Zwischenzeit bauen DNasen die DNA-Verunreinigungen ab. Geben Sie einen Chelatbildner in die Tube; um zweiwertige Kationen zu entfernen und die Zellaggregation zu verhindern.
Übertragen Sie die verdauten Zahnblöcke in eine Petrischale mit DNase-Medium. Entnehmen Sie das Zahnfleischgewebe aus den Zahnblöcken und überführen Sie es in ein Zellsieb.
Zerdrücke das Taschentuch mit einem Kolben. Diese mechanische Dissoziation stört die zahnfleischartige Bindeschicht und löst die Immunzellen aus dem Gewebe. Waschen Sie das Sieb mit Medium und sammeln Sie die freigesetzten Zellen im Filtrat.
Zentrifugieren Sie das Filtrat, pelletisieren Sie die Zellen und entsorgen Sie den Überstand mit den restlichen Enzymen und Ablagerungen. Resuspendieren Sie die Zellpopulation, die Immunzellen trägt, in vollständigen Medien, bereit für die zukünftige Analyse.
Beseitigen Sie das überschüssige Gewebe am Rand der Gingiva und übertragen Sie die Oberkiefer- und Unterkieferblöcke in einen konischen 50-Milliliter-Schlauch mit 5 Millilitern Kollagenase und DNase auf Eis. Verdauen Sie das Gewebe in einem Shaker-Inkubator bei 37 Grad Celsius für 1 Stunde und fügen Sie in den letzten fünf Minuten 50 Mikroliter 0,5 molare EDTA hinzu. Geben Sie dann 5 Milliliter kaltes DNase-Medium in das Gewebe und mischen Sie den Röhrcheninhalt vorsichtig durch Schwenken. Übertragen Sie dann die vier Gewebeblöcke in eine Petrischale und bedecken Sie sie mit 500 Mikrolitern frischem DNase-Medium.
Verwenden Sie ein Skalpell, um die Gingiva von jedem Gewebeblock zu entfernen, und geben Sie den gesamten Inhalt der Schale in ein 70-Mikron-Zellsieb auf einem 50-Milliliter-Röhrchen. Waschen Sie die Petrischale und das Sieb mit 3 bis 5 Millilitern frischem DNase-Medium und drücken Sie dann mit dem Kolben einer sterilen 3-Milliliter-Spritze das Zahnfleischgewebe gegen das Netz des Siebs. Spülen Sie das Sieb mit 30 bis 35 Millilitern kaltem DNase-Medium und zentrifugieren Sie das Filtrat. Dann resuspendieren Sie das Pellet in einem Milliliter des vollständigen Mediums und bestimmen Sie die Anzahl der lebensfähigen Zellen.