Isolierung von Mikropartikeln aus apoptotischen T-Lymphozyten in vitro

Zelluläre Mikropartikel sind membrangebundene Vesikel in Submikrometergröße, die Biomoleküle umschließen, die von der Plasmamembran eukaryotischer Zellen freigesetzt werden, die sich in der Apoptose befinden.

Zur Erzeugung von T-Lymphozyten-abgeleiteten Mikropartikeln, LMPs in vitro, wird ein Kulturkolben mit T-Lymphozytenkultur verwendet. Fügen Sie Actinomycin-D, ein Antibiotikum, hinzu. Inkubieren Sie für eine angemessene Dauer.

Actinomycin-D dringt in die Lymphozyten ein und transloziert in den Zellkern. Es interkaliert zwischen spezifischen DNA-Basenpaaren und hemmt die Transkription. Dies führt zu einem Zellzyklusarrest und aktiviert den apoptotischen Signalweg.

Zu Beginn der Apoptose spaltet und aktiviert die aktivierte Caspase-3 die Rho-assoziierte Kinase ROCK1. ROCK1 wiederum phosphoryliert seine nachgeschalteten Zielproteine, was zu einer Aktomyosinkontraktion führt, die zu Membranblasen und der anschließenden Freisetzung von LMPs, die die zytosolischen und nukleären Komponenten enthalten, in das Medium führt.

Die Zellen durchlaufen schließlich eine Apoptose.

Nach der Inkubation wird das Kulturmedium in ein frisches Röhrchen umgefüllt. Zentrifuge, um die T-Lymphozyten zu p