JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 5:41 Min. • July 8th, 2025
Mausmilz und Lymphknoten auf einem Zellsieb mazerieren. Spülen Sie das Sieb mit einem geeigneten Puffer zum Auffangen von Splenozyten und Lymphozyten.
Inkubieren Sie die Zellen mit einem biotinylierten Antikörpercocktail und magnetischen Anti-Biotin-Mikrokügelchen, die an die Nicht-CD8+-Zellen binden.
Führen Sie die Zellsuspension durch eine magnetische Säule. Aufgrund der magnetischen Kraft binden die bead-gebundenen nicht-CD8+-Zellen an die Säulenwand, während die CD8+ T-Zellen ausscheiden.
Inkubieren Sie die eluierten Zellen mit künstlichen antigenpräsentierenden Zellen, aAPCs. Dabei handelt es sich um magnetische Nanopartikel, die mit einem antigenbeladenen Immunglobulin-Fusionsprotein des Haupthistokompatibilitätskomplexes, MHC-Ig und einem Anti-CD28-Antikörper funktionalisiert sind.
Die antigenbeladenen MHC-Igs binden an unterschiedliche Rezeptoren auf den antigenspezifischen CD8+ T-Zellen. Die Anti-CD28-Antikörper interagieren mit den T-Zell-CD28-Rezeptoren und initiieren so die T-Zell-Aktivierung.
Stellen Sie das Röhrchen mit den magnetischen Nanopartikeln und der Zellmischung auf einen Magnetständer. Die aAPC-gebundenen CD8+ T-Zellen werden vom Magnetfeld angezogen, währen
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