Eine in vitro Technik zur Unterscheidung von GM-CSF-produzierenden T-Helferzellen von naiven T-Zellen

GM-CSF ist ein Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor und wird von GM-CSF-produzierenden T-Helfer- oder T_HGM-Zellen sezerniert. Diese Zellen zeigen eine geringe Expression anderer T-Helferzell-spezifischer Zytokine.

Um mit der

In-vitro-Differenzierung von TH-GM-Zellen zu beginnen, nehmen Sie eine T-Helferzellsuspension - isoliert aus der Milz der Maus - die antigenaktivierte reife Zellen und undifferenzierte naive Zellen enthält.

Fügen Sie fluoreszenzmarkierte Antikörper hinzu, die auf charakteristische Oberflächenmarker der naiven und reifen Zellen abzielen. Führen Sie eine fluoreszenzaktivierte Zellsortierung durch, um die naiven T-Zellen zu isolieren.

Plattieren Sie die Zellen in einem gut beschichteten Behälter, der mit Antikörpern beschichtet ist, die an den T-Zell-Rezeptorkomplex binden. Fügen Sie einen Antikörper hinzu, der an den co-stimulatorischen Rezeptor bindet. Durch die synergistische Bindung werden die Zellen aktiviert.

Fügen Sie Interleukin 7 - ein Zytokin - hinzu, das die Differenzierung in T_HGM-Zellen und die GM-CSF-Produktion induziert. Fügen Sie Phorbolmyristatacetat, PMA – eine entzündungsfördernde Verbindung, Ionomycin – ein Calciumionophor und