Identifizierung von Kinase-Inhibitoren, die die Reaktion der Thymozyten auf starke TCR-Signale modulieren

Beginnen Sie mit Thymozytenzellen von Mäusen in einer Multi-Well-Platte. Fügen Sie magnetische Kügelchen hinzu, die mit Anti-CD3- und Anti-CD28-Antikörpern beschichtet sind. Zu einer Teilmenge von Vertiefungen wird eine geeignete Konzentration des Testkinase-Inhibitors hinzugefügt. Ausbrüten.

Die Antikörper binden an die CD3- und CD28-Rezeptoren der Zelloberfläche auf den doppelt-positiven Thymozyten und aktivieren diese, was zu einer Herunterregulierung der T-Zell-Rezeptoren, TCRs und einer Aktivierung der zytosolischen Proteinkinase führt.

Diese Proteinkinasen aktivieren nachgeschaltete Signalwege, was zu einer erhöhten CD69-Expression auf der Zelloberfläche und einer zytosolischen Caspase-3-Aktivierung führt. Aktivierte Caspase-3 spaltet essentielle zelluläre Proteine und leitet so die Apoptose der Thymozyten ein.

In Zellen, die mit dem Kinase-Inhibitor behandelt wurden, blockieren die Inhibitoren die zytosolischen Kinasen und modulieren die CD69-Expression und die Caspase-3-Aktivierung.

Pipettieren Sie einen mit Fluorophoren markierten Antikörpercocktail ein, der an die TCR-, CD4- und CD8-Co-Rezeptoren sowie CD69-Rezeptoren der Thymozyten bindet. Behandeln Sie die Thymozyten mi