JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:50 Min. • July 8th, 2025
Dextransulfat-Natrium oder DSS induziert Kolitis - eine entzündliche Darmerkrankung -, bei der eine Störung der Darmepithelbarriere zu Entzündungen führt.
Um die Gewebeschädigung zu beurteilen, nehmen Sie fixiertes Dickdarmgewebe, das aus einem Mausmodell der DSS-induzierten Kolitis isoliert wurde. Tauchen Sie das Gewebe in ein Einbettungsmedium, um es leicht schneiden zu können, und frieren Sie es schnell ein.
Entnehmen Sie mit einem Kryo-Mikrotom einen dünnen Gewebeschnitt und sammeln Sie ihn auf einem Objektträger.
Tauchen Sie den Objektträger in eine Lösung, die oxidierten Hämatoxylin-Farbstoff enthält, der an ein Beizmittel – ein Metallkation – gebunden ist und dem Farbstoff eine positive Ladung verleiht. Der Farbstoff-Beizmittel-Komplex bindet an negativ geladene DNA und färbt den Zellkern rötlich-violett.
Tauchen Sie das Gewebe in eine differenzierende Säure-Alkohol-Lösung, wobei Sie unspezifisch gebundene Farbstoffe aus dem Zytoplasma und der extrazellulären Matrix entfernen. Spülen Sie das Gewebe mit einem Bläuungsmittel – einem alkalischen Medium – ab, das den Zellkernen eine blaue Farbe verleiht und den Kontrast verstärkt.
Tauchen Sie den Objektträger in steigende Alkoho
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