JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:09 Min. • July 8th, 2025
Um die Wechselwirkungen zwischen dem Wirt und der Darmmikrobiota ex vivo zu untersuchen, beginnen Sie mit einem murinen Dickdarmgewebe, das frei von spezifischen darmbesiedelnden Bakterien ist. Spülen Sie das Gewebe mit einem Medium, um den Kot zu entfernen, und geben Sie es auf eine Multi-Well-Platte mit einem geeigneten Medium.
Montieren Sie gleichzeitig das Ex-vivo-Gen-Darm-Organkulturgerät mit mehreren Wells.
Jede Vertiefung des Geräts besteht aus zwei gepaarten Ein- und Ausgangsanschlüssen – der erste ist mit dem Dickdarmlumen verbunden und der zweite versorgt die Vertiefungen kontinuierlich mit Medium, um die Lebensfähigkeit des Gewebes zu erhalten.
Übertragen Sie das Gewebe auf das Gerät. Verbinden Sie die proximalen und distalen Enden des Dickdarms mit dem ersten Paar von Eingangs- und Ausgangsanschlüssen. Starten Sie den luminalen Stimulanzienfluss in das Dickdarmlumen und den Mediumfluss in die Vertiefung.
Das Stimulans enthält darmbesiedelnde Bakterien, die schleimschichtabbauende Enzyme absondern, die es ihnen ermöglichen, sich an darunter liegende Epithelzellen anzuheften. Dadurch wird eine Signalkaskade aktiviert, die residente dendritische Zellen dazu veranlasst, ihr
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