Analyse der Wirkung von Tabakproduktzubereitungen auf die Zytokinproduktion mittels intrazellulärer Färbung und Durchflusszytometrie

Bei der Interaktion mit Entzündungsstimulanzien setzen Immunzellen entzündliche Signalmoleküle – Zytokine – frei, um eine Immunantwort hervorzurufen.

Um die Wirkung von Tabakproduktpräparaten, TPPs, zu analysieren, nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit steigenden TPP-Konzentrationen. Besiedeln Sie die Platte mit mononukleären Zellen des menschlichen peripheren Blutes, PBMCs, die Immunzellen enthalten.

Nikotin – ein Immunsuppressivum in TPPs – bindet an nikotinische Acetylcholinrezeptoren und reguliert die entzündungsfördernde Zytokinproduktion herunter. Diese Herunterregulierung ist dosisabhängig, wobei höhere Konzentrationen einen signifikanteren Effekt haben.

Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren, und entsorgen Sie den Überstand mit den TPP-Rückständen.

Resuspendieren Sie die Zellen in einem vollständigen Medium und fügen Sie eine Mischung hinzu, die Lipopolysaccharid – einen Immunstimulator und GolgiPlug – einen Proteintransporthemmer enthält.

Lipopolysaccharidmoleküle interagieren mit Immunzellen, die den Toll-like-Rezeptor-4 enthalten, und lösen intrazelluläre Signalwege und die Produktion von entzündungsfördernden Zytokinen aus. In der Zwischenzeit blockieren GolgiP