Quantifizierung der bakteriellen Infektion in Wirtszellen durch den koloniebildenden Unit-Assay

Um mit dem Assay der koloniebildenden Einheit (KBE) zur Quantifizierung lebensfähiger Bakterien zu beginnen, nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit kultivierten Makrophagen in Wachstumsmedien. Infizieren Sie die Makrophagen mit Listeria monocytogenes, einem pathogenen Bakterium, das zu intrazellulärem Wachstum fähig ist.

Während der Infektion verschlingen die Makrophagen die Bakterien und internalisieren die Bakterien in einem membrangebundenen Kompartiment – einem Phagosom

.

Bakterien scheiden ein porenbildendes Toxin aus und stören die phagosomale Membran. Dabei können die Bakterien in das Zytosol eindringen und sich in den Makrophagen vermehren.

Behandeln Sie die infizierten Makrophagen kurzzeitig mit Gentamicin, einem Antibiotikum, das selektiv nicht internalisierte Bakterien eliminiert und gleichzeitig intrazelluläre Bakterien bewahrt.

Aspirieren Sie die darüber liegenden medien, die Antibiotika enthalten. Als nächstes fügen Sie steriles destilliertes Wasser über die infizierten Makrophagen hinzu, wodurch eine hypotone Umgebung entsteht. Dies führt zur Osmose, bei der Wassermoleküle in die Zellen eindringen und eine Makrophagenlyse verursachen, bei der die intrazellulären Kompon