JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:21 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte, die eine Makrophagenkultur enthält. Infizieren Sie mit fluoreszierenden Protein-exprimierenden Listeria monocytogenes, Lm.
Proteine auf Lm binden an spezifische Makrophagenrezeptoren und internalisieren die Bakterien in einem Phagosom. Darüber hinaus sezerniert Lm porenbildende Toxine, die die Phagosomenmembran stören und Bakterien in das Zytosol freisetzen, wo sie sich replizieren und von Aktinfilamenten des Wirts umgeben werden.
Die Aktin-Assemblierung-induzierenden ActA-Proteine auf Lm induzieren eine kontinuierliche Aktinpolymerisation am hinteren Ende des Bakteriums. Der erzeugte Aktin-Kometenschweif treibt Lm durch das Zytosol und dringt in die Makrophagenzellmembran ein, wobei polymerisiertes, mit Aktin umhülltes Lm in das Medium freigesetzt wird.
Sammeln und fixieren Sie nach der Inkubation das extrazelluläre, aktingebundene, Lm-haltige Medium aus einer Reihe von Vertiefungen. Fixieren Sie den Lm mit Paraformaldehyd. Fügen Sie destilliertes Wasser hinzu, wodurch die Makrophagen aufgebrochen und das intrazelluläre Lm. Sammeln Sie das intrazelluläre Lm und fixieren Sie die Probe mit Paraformaldehyd.
Ersetzen Sie in anderen Vertiefungen das M
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