Messung der bakteriellen Belastung von E. coli in Drosophila melanogaster nach einer E. coli-Infektion

Beginnen Sie mit adulten Drosophila melanogaster-Fliegen, die mit E. coli injiziert wurden. Zu den gewünschten Zeitpunkten nach der Injektion werden anästhesierte Fliegen in separate Mikrozentrifugenröhrchen auf Eis übertragen, um ihre Stoffwechselaktivität zu reduzieren.

Fügen Sie Puffer hinzu und homogenisieren Sie die Fliegen, indem Sie das Gewebe aufspalten und E. coli und endogene Darmmikrobiota freisetzen.

Jedes E. coli-haltige Fliegenhomogenat wird in Multi-Well-Plattenvertiefungen überführt. Füllen Sie die restlichen Vertiefungen mit Puffer. Führen Sie eine serielle Verdünnung des E. coli-haltigen Homogenats durch.

Die verdünnte Homogenatsuspension aus jeder Vertiefung wird ab der niedrigsten Verdünnung als einzelne Punkte auf einer Nähragarplatte abgegeben. Lassen Sie die Flecken in den Agar einziehen. Inkubieren Sie die Platte über Nacht, um die Vermehrung von E. coli zu ermöglichen und sichtbare Kolonien zu bilden. Die Inkubationsdauer ist entscheidend, um die Bildung der endogenen Darmmikrobiota-Kolonien der Fliege zu verhindern.

Zählen Sie die E. coli-Kolonien für jede Fliege aus den Verdünnungen mit zählbaren, nicht überlappenden Kolonien. Berechnen Sie die koloniebil