Assay zur Bestimmung der infektiösen Virusdosis des Drosophila-C-Virus in kultivierten Insektenzellen

0 Aufrufe • 3:23 Min. • July 8th, 2025

Das Drosophila-C-Virus oder DCV, ein positives einzelsträngiges RNA-Virus, infiziert häufig Drosophila melanogaster.

Während der Infektion nutzt DCV die Wirtszellmaschinerie, um das virale Genom zu replizieren und schließlich Viruspartikel zu produzieren. Infizierte Zellen zeigen zytopathische Wirkungen, CPE, und durchlaufen eine Lyse oder sterben ohne Lyse, da sie sich nicht teilen können.

Zur Bestimmung der durchschnittlichen infektiösen Dosis von Virusgewebekulturen, der DCV-Konzentration, bei der die Hälfte der infizierten Zellen CPE aufweist, wird mit seriell verdünnten DCV-Suspensionen begonnen.

Transfer auf eine Multi-Well-Platte mit semi-adhärenten Drosophila S2*-Zellen, die aus Embryonen von Drosophila melanogaster, einem natürlichen DCV-Wirt, im Spätstadium stammen. Vertiefungen, die Medium und Zellen enthalten, dienen als Negativkontrollen.

Inkubieren Sie, damit das Virus die Zellen infizieren kann. Virusinfizierte Zellen zeigen CPE durch Zellschädigung und Tod. Beobachten Sie nach der Inkubation die Vertiefungen unter dem Mikroskop.

Identifizieren Sie CPE-positive und -negative Wells über Verdünnungen hinweg. Verwenden Sie eine geeignete Methode, um die durchschnittlich

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