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Immunologie
0 Aufrufe • 3:02 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Testplatte mit Makrophagen, die mit Lipopolysaccharid geprimt sind.
Priming erhöht die Expression von inaktiven proinflammatorischen Zytokinvorläufern und NLRP3-Proteinen.
Fügen Sie Nigericin hinzu, ein Kaliumionophor, das den Ionenausfluss fördert. Dadurch wird der intrazelluläre Kaliumspiegel gestört und NLRP3-Proteine werden zu einem großen Komplex veranlasst.
Oligomerisiertes NLRP3 rekrutiert die Adapterproteine ASC und bewirkt deren Polymerisation. ASC-Filamente rekrutieren Pro-Caspase-1 und bilden NLRP3-Inflammasom, einen Multiproteinkomplex.
Pro-Caspase-1 erfährt eine Proximity-induzierte Autoaktivierung, bei der Caspase-1 entsteht. Caspase-1 spaltet das entzündungsfördernde Zytokin und das Gasdermin-D-Protein, wodurch eine Plasmamembranpore entsteht.
Dies führt zu einer Zytokinsekretion und einem entzündlichen programmierten Zelltod, Pyroptose, wobei intrazelluläre Inhalte, einschließlich Laktatdehydrogenase oder LDH, freigesetzt werden. Sammeln Sie den LDH-haltigen Überstand.
Fügen Sie eine Substratmischung hinzu – Laktat, Jodnitrotetrazoliumviolett oder INT-Farbstoff, NAD+ und Diaphorase. LDH oxidiert Laktat zu Pyruvat und reduziert gleichzeitig NAD+. Diap
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