Isolierung von Lipiden aus Neutrophilen aus menschlichem Blut durch biphasische Trennung

Nehmen Sie ein Glasröhrchen, das neutrophiles Homogenat mit freigesetzten intrazellulären Komponenten enthält.

Fügen Sie Methanol hinzu, ein polares Lösungsmittel, das die Lipid-Lipid- und Lipid-Protein-Wechselwirkungen stört. Die inhärente Polarität von Methanol verteilt die polaren Lipide gleichmäßig und löst sie auf. Fügen Sie als nächstes Chloroform hinzu, ein unpolares organisches Lösungsmittel, das mit unpolaren Lipiden interagiert, wodurch sie sich dispergieren und auflösen.

Zentrifugieren Sie, um das proteinhaltige Pellet von dem Überstand zu trennen, der Lipide, Polysaccharide und Zelltrümmer enthält. Den Überstand in ein frisches Glasröhrchen geben. Chloroform und destilliertes Wasser hinzufügen. Zentrifugieren Sie die Probe.

Durch die spontane Wasserzugabe entsteht ein zweiphasiges System, das die Biomoleküle innerhalb der unteren Chloroform- und der oberen Wasser-Methanol-Schichten aufteilt.

Die Chloroformschicht besteht aus gelösten unpolaren Lipiden, während die obere Schicht nicht-lipidische Verunreinigungen und mehr polare Lipide enthält. Entfernen Sie die obere Wasser-Methanol-Schicht, ohne die lipidhaltige Schicht zu stören.

Verwenden Sie einen Vakuumkonzentrator,