Eine Technik zur Beurteilung der Immunantwort gegen ein Antigen durch Induktion einer Hautentzündung

Nehmen Sie eine betäubte Maus mit enthaarten Ohren und tragen Sie das Testantigen – ein Hapten, das in einer geeigneten Vehikellösung gemischt ist – auf die exponierte Haut auf. Die Vehikellösung erleichtert die Penetration von Hapten durch die äußerste Epidermisschicht, um die darunter liegende Dermis zu erreichen.

Hapten bindet an Hautproteine und bildet ein Immunogen, das von antigenpräsentierenden Zellen oder APCs erkannt wird. Nach der Verschlingung verarbeiten APCs das Immunogen und zeigen es auf ihrer Oberfläche an.

APCs wandern in die Lymphknoten, geben das Immunogen an naive T-Zellen ab und aktivieren diese. Aktivierte Zellen differenzieren sich zu geprimten Gedächtnis-T-Zellen – von denen eine Untergruppe auf die Haut wandert.

Bei erneuter Exposition der Hapten präsentieren APCs das Immunogen an die geprimten T-Zellen und induzieren so die proinflammatorische Zytokinfreisetzung.

Zytokine veranlassen Keratinozyten und Mastzellen, Chemokine freizusetzen, die an zirkulierende Neutrophile binden und deren Extravasation erleichtern. Die extravasierten Neutrophilen erreichen die Entzündungsstelle.

Zytokine aktivieren Neutrophile, um proteolytische Enzyme und reaktive Sauerstoffspezies zu produzieren – was zu Gewebeschäden führt und die Entzündung verstärkt.

Zu Beginn wird die Maus mit einer intraperitonealen Injektion eines Anästhesiecocktails betäubt und eine adäquate Sedierung mit einem Zehenkneiftest bestätigt. Tragen Sie anschließend Haarentfernungscreme auf die Rückenfläche beider Ohren auf. Wischen Sie es innerhalb einer Minute ab und waschen Sie die Haut mit Wasser.

Messen Sie die Dicke des Ohrs, wo die Anwendungen durchgeführt wurden, mit einem Mikrometer. Bringen Sie die Maus später in ihren eigenen Käfig zurück, nachdem sie sich von der Narkose erholt hat, und lassen Sie die Maus mindestens drei Tage ruhen, bevor Sie weitere Tests durchführen.

Betäuben Sie die Maus nach drei Tagen erneut und messen Sie die Ohrdicke erneut, um sicherzustellen, dass sie nicht gereizt wird. Tragen Sie dann 12,5 Mikroliter 1,25% Oxazolon auf jede Seite des rechten Ohrs auf und tragen Sie 12,5 Mikroliter der Aceton-Olivenöl-Vehikellösung auf jede Seite des linken Ohrs auf.

Beobachten Sie wie immer, wie sich die Maus von der Narkose erholt. Messen Sie 24 Stunden später erneut die Dicke des Ohrs unter Narkose, um sicherzustellen, dass die durch Oxazolon induzierte Hautentzündung aufgetreten ist.