JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:25 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit Makrophagen.
Geben Sie Cryptococcus neoformans in die Testvertiefungen, während die Kontrollvertiefungen nur Makrophagen enthalten.
Makrophagen phagozytieren Pilze in Phagosomen.
Mit Puffer waschen, um nicht phagozytierte Pilze zu entfernen. Fügen Sie antibiotikafreie Medien hinzu. Ausbrüten.
Das Phagosom verschmilzt mit dem Lysosom und bildet ein Phagolysosom. Pilze modulieren den pH-Wert von Phagolysosomen und besitzen intrinsische Mechanismen, um unter rauen phagolysosomalen Bedingungen zu überleben. Pilze permeabilisieren die phagolysosomale Membran und replizieren sich, begleitet von einer zytosolischen Akkumulation von Polysaccharid-gefüllten Vesikel.
Intrazellulärer Pilzaufenthalt und -replikation verursachen zelluläre Schäden und lösen Zelltodwege aus. Dies führt zu einer Makrophagenlyse und einer intrazellulären Freisetzung von Inhalten, einschließlich Laktatdehydrogenase oder LDH, in Medien.
Sammeln Sie LDH-haltige Medien zu unterschiedlichen Zeitpunkten. Lysieren Sie die Kontrollmakrophagen zu ähnlichen Zeitpunkten, um eine maximale zelluläre LDH-Freisetzung zu erzielen. Geben Sie die Assay-Mischung zu den gesammelten Medien und Lysa
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