JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:00 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit mesenchymalen Stammzellen (MSCs) in ausgewählten Wells.
Einführung von Makrophagen und Inkubation, um die Interaktion zwischen MSC und Makrophagen in den Co-Kultur-Vertiefungen zu erleichtern.
Geben Sie Zymosan – eine Komponente der Hefezellwand – die an ein pH-empfindliches Fluorophor konjugiert ist, in alle Vertiefungen.
Makrophagen-Scavenger-Rezeptoren binden an Zymosan und lösen dessen Einlagerung in ein Phagosom aus, das mit einem Lysosom zu einem Phagolysosom verschmilzt.
Ein saurer pH-Wert im Inneren des Phagolysosoms bewirkt, dass das Fluorophor Fluoreszenz emittiert.
In den Co-Kultur-Wells projizieren MSCs tunnelnde Nanoröhren (TNT), zytoplasmatische Fortsätze, die eine Brücke zu Makrophagen schlagen. MSC-Mitochondrien wandern durch das TNT, um in die Makrophagen einzudringen, wodurch sich die Gesamtzahl der funktionellen Mitochondrien erhöht.
Eine erhöhte Anzahl der Mitochondrien erhöht die Produktion von Adenosintriphosphat oder ATP, was den Energiebedarf für eine Zunahme der Phagozytose anheizt.
Zeichnen Sie die Fluoreszenzintensität über die Zeit von den internalisierten Fluorophor-konjugierten Zymosanen auf.
Die Co-Kultur zeigt ein
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