Ein Mausmodell der geprimten mykobakteriellen Uveitis zur Untersuchung der postinfektiösen Uveitis

Die chronische Augenentzündung oder Uveitis, die auf eine systemische bakterielle Infektion folgt, wird als postinfektiöse Uveitis bezeichnet.

Um ein postinfektiöses Uveitis-Modell zu erstellen, nehmen Sie eine anästhesierte Maus, die zuvor mit hitzeabgetötetem Mycobacterium tuberculosis oder Mtb immunisiert war. Priming – die vorherige Exposition gegenüber dem Immunogen – erzeugt zirkulierende Mtb-spezifische T-Zellen.

Injizieren Sie das gleiche Immunogen in die Glaskörperhöhle des Auges. Mykobakterien diffundieren durch den Glaskörper und breiten sich über das Auge aus. Die Augen-Blut-Schranke schränkt den Eintritt von Immunzellen in das Auge ein – was es zu einem immunprivilegierten Organ macht.

Geweberesidente antigenpräsentierende Zellen oder APCs – in der perivaskulären Region – treffen auf das diffuse Immunogen. Nach der Internalisierung des Immunogens verarbeiten APCs das Mtb-Antigen und zeigen es über den Haupthistokompatibilitätskomplex (MHC) auf der Oberfläche an.

Aktivierte APCs setzen auch proinflammatorische Zytokine frei, die die Permeabilität der endothelialen Tight-Junction-Barriere im Blutgefäß bewirken. Leukozyten, einschließlich Neutrophiler und Mtb-spezifischer T-Zellen, extravasieren in den perivaskulären Raum.

Mtb-spezifische T-Zellen binden an ihr Antigen auf APCs und setzen proinflammatorische Zytokine frei, die Neutrophile dazu veranlassen, reaktive Sauerstoffspezies (ROS) zu produzieren und eine Degranulation zu verursachen.

Freigesetzte granuläre Proteasen und ROS verursachen einen Abbau des Gewebeparenchyms und einen Zusammenbruch der Augen-Blut-Schranke – was die Entzündung verschlimmert.

Das Infektionsmodell ist bereit für die nachgelagerte Analyse.

Am Tag der Injektion, nachdem die Tiefe der Vollnarkose bestätigt wurde, betäuben Sie die Hornhaut mit einem Tropfen 0,5% Tetracain und erweitern Sie die Pupille mit einem Tropfen 2,5% Phenylephrin. Nachdem Sie überschüssige Flüssigkeit abgetupft haben, geben Sie einen Tropfen 5% Betadin auf die Augenoberfläche und das umgebende Haar, um das Risiko einer Endophthalmitis zu verringern.

Entfernen Sie nach zwei bis drei Minuten das Betadin und bedecken Sie das Auge mit 0,3 % Hypromellose-Gel, um Trockenheit unter Narkose und Kataraktbildung zu verhindern. Laden Sie als Nächstes eine 10-Mikroliter-Spritze mit der Antigen-Fluorescein-Mischung. Platzieren Sie dann die Maus in Bauchlage auf der Plattform und fixieren Sie den Mauskopf mit dem rechten und linken Ohrbügel.

Positionieren Sie die Maus unter dem Zielfernrohr und richten Sie sie so aus, dass der obere nasale Aspekt des rechten Auges sichtbar ist. Verschieben Sie dann mit einer 30-Gauge-Nadel die Wimpern, legen Sie die Sklera frei und visualisieren Sie den Limbus und das radiale Blutgefäß

Anschließend bohren Sie mit einer sterilen 30-Gauge-Nadel ein Führungsloch in die Sklera 1 bis 2 Millimeter hinter dem Limbus. Führen Sie dann die an der Injektionshalterung befestigte 34-Gauge-Nadel durch das Führungsloch in einem Winkel in das Auge ein, der die Linse vermeidet, aber platzieren Sie die Nadelspitze in der Glaskörperhöhle.

Injizieren Sie mit einer Mikrospritzenpumpensteuerung vorsichtig 1 Mikroliter des M tuberkulose-Extrakts in die Glaskörperhöhle. Erhöhen Sie bei gleichbleibendem Reflux das Injektionsvolumen auf 1,5 Mikroliter, um eine angemessene Dosisabgabe zu gewährleisten. Bestätigen Sie die intravitreale Platzierung, indem Sie einen grünlichen Reflex im Auge sichtbar machen, und entfernen Sie nach zehn Sekunden die Nadel aus dem Auge.