Vorbereitung und Quantifizierung von Mycobacterium bovis BCG lux Inokulum zur Infektion

Beginnen Sie mit einer aufgetauten Kultur von Mycobacterium bovis BCG lux, einem genetisch veränderten biolumineszierenden Stamm von abgeschwächtem Mycobacterium bovis, der das Reporter-Luciferase-Enzym exprimiert.

Die Suspension wird in einen Kulturkolben geimpft, der das antibiotische Hygromycin-supplementierte Wachstumsmedium enthält. Ausbrüten. BCG lux beherbergt das Hygromycin-resistente Gen, das sein Überleben und Wachstum erleichtert.

Bereiten Sie nach der Inkubation geeignete Kulturverdünnungen mit einem Puffer in Luminometerröhrchen vor. Übertragen Sie es auf das Luminometer, das mit einer langkettigen aliphatischen Aldehyd-Substratlösung beladen ist. Während des Laufs wird der Aldehyd in die mykobakterielle Suspension injiziert, die in die Zellen gelangt.

Bakterielle Luciferase katalysiert die Oxidation des endogenen reduzierten Flavinmononukleotids und des Aldehyds, was zu einer blau-grünen Lichtemission führt. Die gemessene Biolumineszenzintensität gibt Aufschluss über die metabolische Aktivität von BCG lux und korreliert mit der Messung lebensfähiger Bakterien oder koloniebildender Einheiten, KBE.

Zentrifugieren Sie anschließend die verbleibende Mykobakterienkultur. Re