Ein Air-Pouch-Mausmodell für die Lipopolysaccharid-induzierte entzündliche Exsudatsammlung

Legen Sie eine betäubte Maus auf die sterile Operationsunterlage, die an einer Beatmungseinheit mit einem kontinuierlichen Fluss von Sauerstoff und einem Anästhesiegas befestigt ist.

Befüllen Sie die Spritze mit einem Filter mit steriler Luft. Befestigen Sie eine Nadel an der Spritze und injizieren Sie sterilisierte Luft subkutan in den Rücken der Maus, um einen Luftbeutel in den Gewebeschichten zu erzeugen. Überwachen Sie die Maus bis zur Wiederherstellung.

Betäuben Sie die Maus erneut und verabreichen Sie das Lipopolysaccharid LPS in den Luftbeutel. LPS bindet an den Toll-like-Rezeptor 4, TLR-4 auf den geweberesidenten Makrophagen und dendritischen Zellen und aktiviert diese.

Die aktivierten Zellen setzen verschiedene Entzündungsmediatoren wie Zytokine und Chemokine frei, die Neutrophile und andere Immunzellen anziehen. Diese Mediatoren erhöhen auch die Gefäßdurchlässigkeit der nahe gelegenen Blutgefäße, so dass Immunzellen und lösliche Faktoren aus dem Blutkreislauf in den Luftbeutel gelangen können.

Wenn sich Flüssigkeit im Beutel ansammelt, bildet sie ein Exsudat, das aus Entzündungszellen und verschiedenen bioaktiven Molekülen besteht.

Euthanasieren Sie die Maus und injizieren Sie einen geeigneten Waschpuffer in den Luftbeutel. Sammeln Sie das entzündliche Exsudat in einem Mikrozentrifugenröhrchen und zentrifugieren Sie. Entsorgen Sie den Überstand und suspendieren Sie die Zellen wieder im Waschpuffer.

Analysieren Sie das entzündliche Exsudat, um das Neutrophilenverhältnis zu quantifizieren und das Ausmaß ihrer Infiltration zu bestimmen.

Nach der Anästhesierung der Mäuse am Tag Null verwenden Sie einen 0,22-Mikron-Filter, der an einer Fünf-Milliliter-Spritze befestigt ist, um ein Volumen von drei Millilitern sterilisierter Luft zu erhalten. Heben Sie die hintere Haut der anästhesierten Maus mit einer Pinzette an und injizieren Sie subkutan mit einer 26 Gauge x 3/8 Zoll großen Nadel drei Milliliter der sterilisierten Luft.

Nehmen Sie die Mäuse nach der Behandlung aus der Beatmungseinheit und setzen Sie sie in einen gut eingestellten Käfig. Überwachen Sie die Mäuse, um sicherzustellen, dass sie am Leben sind, bis sie sich zu bewegen beginnen. Injizieren Sie am dritten Tag weitere drei Milliliter sterilisierte Luft in die zuvor eingerichtete Lufttasche, um den Luftbeutel zu halten.

Injizieren Sie am sechsten Tag verschiedene Behandlungen in den Luftbeutel. Injizieren Sie einen Milliliter PBS als Negativkontrolle und injizieren Sie einen Milliliter eines Mikrogramms pro Milliliter LPS als Positivkontrolle, um eine lokale Entzündung auszulösen. Nach sechs Stunden opferst du die Mäuse.

Injizieren Sie für jeden Luftbeutel einen Milliliter Waschpuffer, um den Luftbeutel zu waschen und das entzündliche Exsudat in einem 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen aufzufangen. Waschen Sie dann den Luftbeutel zweimal mit zwei Millilitern Waschpuffer und sammeln Sie das entzündliche Exsudat im selben Zentrifugenröhrchen.

Bei 100 x g 10 Minuten bei Raumtemperatur zentrifugieren. Entsorgen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen in einem Milliliter Waschpuffer. Zählen Sie die Zellen, um das Neutrophilenverhältnis mit dem automatischen Hämatologie-Analysator zu quantifizieren.