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Immunologie
0 Aufrufe • 3:43 Min. • July 8th, 2025
Um die Infiltration von Immunzellen in uropathogenem, mit E. coli infiziertem Mausblasengewebe zu quantifizieren, legen Sie das zerkleinerte Gewebe in einen Verdauungspuffer, der Kollagenase und Desoxyribonuklease enthält.
Inkubieren Sie unter regelmäßigem Schütteln, um das Gewebe zu stören.
Kollagenase verdaut die extrazelluläre Matrix des Gewebes und setzt Zellen frei. Desoxyribonuklease baut störende freie DNA ab.
Nach der Inkubation einen Puffer mit einem Chelatbildner und fötalem Rinderserum hinzufügen, um die Verdauungsenzyme zu inaktivieren.
Die verdaute Mischung wird durch ein Sieb geleitet, um Gewebereste und Bindegewebe zu entfernen und eine einzellige Suspension zu erhalten.
Zentrifugieren und resuspendieren Sie die Zellen in einem Puffer, der Fc-blockierende Antikörper enthält. Diese Antikörper binden an Fc-Rezeptoren von Immunzellen, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Fügen Sie Fluorophor-markierte Anti-CD45-Antikörper hinzu, die an das Transmembran-CD45-Protein auf Immunzellen binden.
Zentrifugieren Sie die resuspendierten Zellen und leiten Sie sie durch ein Zellsieb, um Zellaggregate zu entfernen.
Messen Sie mit einem Durchflusszytometer die Fluor
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